2.3 Grundlagen der Gentechnik

Inhalt von "2.3 Grundlagen der Gentechnik":

• 2.3.1 PCR (Polymerase-Kettenreaktion, polymerase chain reaction)
  • 2.3.1.1 Anwendung und Durchführung
  • 2.3.1.2 Nachweis der stark erhöhten Zahl der Fragmente mit dem gesuchten Gen
  • 2.3.1.3 Amplifikation der gesamten DNA
    • 2.3.1.3.1 Der genetische Fingerabdruck
• 2.3.2 Grundprinzip der Genklonierung
  • 2.3.2.1 Bedeutung überstehender Enden
  • 2.3.2.2 Restriktionsanalyse mit Hilfe der Agarosegelelektrophorese
    • 2.3.2.2.1 Theorie zur Gelelektrophorese von DNA
    • 2.3.2.2.2 Auswertung
  • 2.3.2.3 Genklonierung mit E. coli
    • 2.3.2.3.1 Gewünschte Eigenschaften von Plasmidvektoren
    • 2.3.2.3.2 Eigenschaften der verwendeten Wirtszellen
    • 2.3.2.3.3 Vorgehensweise zur Selektion und Identifikation rekombinanter Kolonien
  • 2.3.2.4 Klonierung mit pUC-Plasmiden
    • 2.3.2.4.1 Test auf Lactose-Abbau
    • 2.3.2.4.2 Prinzip der Koloniefärbung bei Klonierung mit pUC-Plasmiden zur Identifizierung rekombinanter Kolonien
• 2.3.3 Tricks in der Gentechnik
  • 2.3.3.1 Transformation - Methode zum Einschleusen gentechnisch veränderter DNA in Bakterien
    • 2.3.3.1.1 Wichtige Faktoren für erfolgreiche Transformation
    • 2.3.3.1.2 Form der aufgenommenen DNA
    • 2.3.3.1.3 Transformationsrate bei E. coli
    • 2.3.3.1.4 Suche nach dem richtigen Klon
  • 2.3.3.2 Hybridisierung mit einer Gensonde
    • 2.3.3.2.1 Prinzip der Hybridisierung
    • 2.3.3.2.2 Herstellung radioaktiv markierter Gensonden
    • 2.3.3.2.3 Nichtradioaktive DNA-Markierung (non radioactive labelling)
    • 2.3.3.2.4 Koloniehybridisierung
    • 2.3.3.2.5 Plasmidisolierung aus E. coli
  • 2.3.3.3 Southern Hybridisierung (blotting, transfer)
  • 2.3.3.4 Nachweis von Genen mit Hilfe der PCR
• 2.3.4 DNA-Sequenzierung
  • 2.3.4.1 Kettenabbruch nach SANGER et al. (1977)
    • 2.3.4.1.1 Gewinnung von Einzelstrang und Primer
    • 2.3.4.1.2 Kettenabbruch durch Dideoxy-Nukleotide
  • 2.3.4.2 Sequencer
    • 2.3.4.2.1 Monofluorophores System
    • 2.3.4.2.2 Multifluorophores System
  • 2.3.4.3 Taq-Cycle-Sequenzierung