3.10.2.2.2 SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE)
In wäßriger Lösung werden Proteine zu stäbchenförmig gestreckten Molekülen entfaltet (denaturiert), wobei sich die Kohlenwasserstoffketten eng an die hydrophoben Proteinbereiche anlagern und die geladenen Sulfatreste des SDS[1] zum wäßrigen Medium gerichtet sind. Aufgrund der nunmehr negativen Überschußladung wandern die Proteine im elektrischen Feld zum Pluspol, wobei sie nur noch nach ihrer Größe aufgetrennt werden. Auch hier besteht im größten Teil des Gels eine lineare Abhängigkeit zwischen der Wanderungsstrecke und dem lg(Molekülmasse). Trägt man im selben Gel Referenzproteine bekannter Molekülmasse auf, läßt sich so aus deren Wanderstrecken eine Kalibriergerade erstellen und so die zur Wanderstrecke des gesuchten Proteins gehörige Molekülmasse ermitteln. Zur Sichtbarmachung der Gelbanden wird das Gel mit einem Farbstoff, meist Coomassie Blue, angefärbt. Wird der Proteinlösung eine reduzierende Substanz, i. d. R. Mercaptoethanol, zugesetzt, werden alle Disulfidbrücken in den Proteinen gespalten, so daß nunmehr auch die einzelnen Polypetidketten elektrophoretisch getrennt und deren Molekülmassen bestimmt werden können.
[1]: sodium dodecyl sulfate
