2.3.4.2 Sequencer
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Ein Sequencer besteht im Grunde aus drei Komponenten,
- einer vertikalen PAA[1]-Elektrophoreseeinheit (mit 36 – 40 Taschen),
- einem Laserdetektorsystem (Argonlaser, Hauptemissionslinien bei 488 und 514 nm) und
- einem angeschlossenen Computer mit Drucker.
Als Polymerase wird DNA-Polymerase I aus E. coli (bzw. ein KLENOW-Fragment) oder Sequenase[2] verwendet, als Fluoreszenzfarbstoff verschiedene Fluorescein- oder Rhodamin-Verbindungen. Die fluoreszienzmarkierten Nukleotide müssen von der Polymerase "angenommen" werden.
[1]: Polyacrylamid
[2]: T7-induzierte DNA-Polymerase; nach Injektion der T7-Phagen-DNA in die E. coli-Zelle wird es als Folge der Ablesung eines frühen Phagengens gebildet; besitzt höhere Syntheserate als DNA-Polymerase I, ist aber nicht bei jeder DNA anwendbar.
