2.2.2.2 GRAM-Färbung

Voraussetzung für die GRAM-Färbung ist, daß sich die zu färbenden Bakterien in der log-Phase befinden müssen. Es wird dann wie folgt vorgegangen:

• 1. Bakterien werden auf dem Objektträger hitzefixiert
• 2. Färben mit Gentianaviolett (Kristallviolett). Dieser Farbstoff lagert sich im periplasmatischen Raum[1] an.
• 3. Anschließend folgt eine Fixierung (Beizen) mit LUGOLscher Iodlösung (enthält einen Iod-Kaliumiodid-Komplex). Es bildet sich ein schwerlöslicher Farblack, der sich an der Cytoplasmamembran niederschlägt.
• 4. Differenzieren mit 96 Vol.-% Ethanol:

• gramnegative Bakterien:

Der Ethanol löst die lipidreiche äußere Membran ab. Durch die relativ großen Poren des darunterliegenden Mureins kann der Farblack herausgelöst werden, wodurch die Zellen farblos werden.

• grampositive Bakterien:

Der Ethanol entzieht hier dem Murein die Hydrathüllen, wodurch die Poren enger werden. Dadurch kann der Farblack nicht entweichen und die Zellen bleiben weiterhin blau-violett.

• 5. Gegenfäbren mit Safranin oder Fuchsin (beide sind rote Farbstoffe)

• grampositive Bakterien:

Hier kann der rote Farbstoff eindringen und die Zellen rötlich färben.

• gramnegative Bakterien:

Der rote Farbstoff kann hier nicht eindringen, wodurch die Zellen blauviolett bleiben.

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[1]: Raum zwischen Cytoplasmamembran und Murein