2.2.2.2 GRAM-Färbung: Unterschied zwischen den Versionen
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*1. Bakterien werden auf dem Objektträger hitzefixiert | *1. Bakterien werden auf dem Objektträger hitzefixiert | ||
| − | *2. Färben mit Gentianaviolett (Kristallviolett). Dieser Farbstoff lagert sich im periplasmatischen Raum[1] an. | + | *2. Färben mit '''Gentianaviolett''' ('''Kristallviolett'''). Dieser Farbstoff lagert sich im '''periplasmatischen Raum'''[1] an. |
| − | *3. Anschließend folgt eine Fixierung (Beizen) mit | + | *3. Anschließend folgt eine '''Fixierung''' ('''Beizen''') mit '''LUGOLscher Iodlösung''' (enthält einen Iod-Kaliumiodid-Komplex). Es bildet sich ein schwerlöslicher '''Farblack''', der sich an der Cytoplasmamembran niederschlägt. |
| − | *4. Differenzieren mit 96 Vol.-% Ethanol: | + | *4. '''Differenzieren mit 96 Vol.-% Ethanol''': |
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| − | :::Der Ethanol löst die lipidreiche äußere Membran ab. Durch die relativ großen Poren des darunterliegenden Mureins kann der Farblack herausgelöst werden, wodurch die Zellen farblos werden. | + | ::::Der Ethanol löst die lipidreiche äußere Membran ab. Durch die relativ großen Poren des darunterliegenden Mureins kann der Farblack herausgelöst werden, wodurch die Zellen farblos werden. |
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| − | :::Der Ethanol entzieht hier dem Murein die Hydrathüllen, wodurch die Poren enger werden. Dadurch kann der Farblack nicht entweichen und die Zellen bleiben weiterhin blau-violett. | + | ::::Der Ethanol entzieht hier dem Murein die Hydrathüllen, wodurch die Poren enger werden. Dadurch kann der Farblack nicht entweichen und die Zellen bleiben weiterhin blau-violett. |
| − | *5. Gegenfäbren mit Safranin oder Fuchsin (beide sind rote Farbstoffe) | + | *5. '''Gegenfäbren mit Safranin oder Fuchsin''' (beide sind rote Farbstoffe) |
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| − | :::Hier kann der rote Farbstoff eindringen und die Zellen rötlich färben. | + | ::::Hier kann der rote Farbstoff eindringen und die Zellen rötlich färben. |
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| − | :::Der rote Farbstoff kann hier nicht eindringen, wodurch die Zellen blauviolett bleiben. | + | ::::Der rote Farbstoff kann hier nicht eindringen, wodurch die Zellen blauviolett bleiben. |
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<small>[1]: Raum zwischen Cytoplasmamembran und Murein</small> | <small>[1]: Raum zwischen Cytoplasmamembran und Murein</small> | ||
Aktuelle Version vom 13. November 2008, 13:09 Uhr
Voraussetzung für die GRAM-Färbung ist, daß sich die zu färbenden Bakterien in der log-Phase befinden müssen. Es wird dann wie folgt vorgegangen:
- 1. Bakterien werden auf dem Objektträger hitzefixiert
- 2. Färben mit Gentianaviolett (Kristallviolett). Dieser Farbstoff lagert sich im periplasmatischen Raum[1] an.
- 3. Anschließend folgt eine Fixierung (Beizen) mit LUGOLscher Iodlösung (enthält einen Iod-Kaliumiodid-Komplex). Es bildet sich ein schwerlöslicher Farblack, der sich an der Cytoplasmamembran niederschlägt.
- 4. Differenzieren mit 96 Vol.-% Ethanol:
- gramnegative Bakterien:
- Der Ethanol löst die lipidreiche äußere Membran ab. Durch die relativ großen Poren des darunterliegenden Mureins kann der Farblack herausgelöst werden, wodurch die Zellen farblos werden.
- grampositive Bakterien:
- Der Ethanol entzieht hier dem Murein die Hydrathüllen, wodurch die Poren enger werden. Dadurch kann der Farblack nicht entweichen und die Zellen bleiben weiterhin blau-violett.
- 5. Gegenfäbren mit Safranin oder Fuchsin (beide sind rote Farbstoffe)
- grampositive Bakterien:
- Hier kann der rote Farbstoff eindringen und die Zellen rötlich färben.
- gramnegative Bakterien:
- Der rote Farbstoff kann hier nicht eindringen, wodurch die Zellen blauviolett bleiben.
[1]: Raum zwischen Cytoplasmamembran und Murein
