Quelltext der Seite 2.3.2.3 Genklonierung mit E. coli

Unter '''Genklonierung''' versteht man die '''Konstruktion von DNA-Molekülen mit neuen''' (zusätzlichen) '''Genen''' und ihre '''Expression''' in den erbgleichen Zellen eines Zellklons. Die gentechnisch veränderte DNA wird '''rekombinante DNA''' genannt.
Bei der Genklonierung kommen folgende "Werkzeuge" zum Einsatz:
*DNA, in die die Fremd-DNA eingebaut wird ('''Vektor-DNA''', '''Vehikel''', '''Genfähre'''), z. B. Plasmide, Virus-DNA, etc.
*Ein Stück Fremd-DNA, das das gewünschte Gen enthält und in den Vektor eingefügt werden soll ('''Passagier-DNA''').
*Zellen, die die rekombinante DNA enthalten und in die entsprechenden Genprodukte übersetzen sollen ('''Wirtszellen''').
*'''Restriktionsenzyme''', '''DNA-Ligase''' und eine Reihe '''anderer spezieller Enzyme''', die für die Herstellung der rekombinanten DNA und deren Aufnahme durch die Wirtszellen benötigt werden.

Im Groben werden bei der Genklonierung folgende Arbeitsschritte durchlaufen:
*1. '''Verdauung''' von '''Vektor-''' und '''Fremd-DNA''' mit geeigneten '''Restriktionsenzymen'''.
*2. '''Verknüpfung der Spaltprodukte''' mit '''DNA-Ligase''' ('''Ligation''').
*3. '''Einführen der rekombinanten DNA''' in geeignete '''Wirtszellen''' (z. B. durch '''Transformation''').
*4. '''Vermehrung der Wirtszellen''' und '''Expression der rekombinanten DNA'''.
*5. '''Identifizierung''' und '''Isolierung''' der Zellklone, die die gewünschte rekombinante DNA erhalten haben.